lunes, 2 de junio de 2008

Funcionamiento hepático


UNIVERSIDAD DE ORIENTE.
NÚCLEO BOLIVAR.
DEPARTAMENTO DE BIOANÁLISIS.
CÁTEDRA: Laboratorio De Bioquímica Clínica
EVALUACION DEL FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO
Profesor.
Germán Guzmán.
Bachiller.
Garcia M, Yelifer.
C.I: 17.591.715.
Ciudad Bolívar, 25 de Abril de 2008
INDICE.

Introducción………………………………………………………………………... 3
Desarrollo.………………………………………………………………………….. 4
Causas de aumento……………………………………………………………… 5
Causas moderadas………………………………………………………………. 5
Causas de disminución.……………………………………………………….. 5
Materiales……………...…………………………………………………………… 6
Condiciones de la muestra……………………………………….…………… 6
Condiciones de la reacción……………………………………………………. 7
Técnica de ALT (fundamento)….……………………………………………. 7
Valores de referencia de ALT…...…………………………………………… 8
Procedimiento para la determinación de ALT……….…………………. 8
Cálculos de la determinación a ALT..…………………………………..… 8
Conclusiones de la determinación de AST….…………………………… 8
Técnica de AST (fundamento)…………… …….………………………….. 9
Valores de referencia de AST ………….……………………………………. 9
Procedimiento para la determinación de AST…………………………. 10
Cálculos de la determinación a ALT..…………………………………..… 10
Conclusiones de la determinación de AST..…………………………… 10
Limitaciones de los método……………………….……………………….… 10
Bibliografía………………………………………………………………………….. 11




INTRODUCCION.
La evaluación de pacientes con elevación de las transaminasas es un problema habitual en la práctica clínica, tanto del médico de atención primaria como del digestólogo. Muchos de estos casos se detectan de manera accidental, en pacientes sin síntomas de enfermedad hepática o biliar, en la analítica solicitada por otros motivos, como, por ejemplo, estudio preoperatorio, donaciones sanguíneas o “revisiones médicas”. Recientemente se ha comunicado que las alteraciones hepáticas no son correctamente evaluadas en Atención Primaria. En muchas ocasiones porque su médico pensó que el consumo de alcohol era la causa de las alteraciones, sin realizar ninguna investigación (debemos recordar que los pacientes alcohólicos tienen con más frecuencia hepatitis B y C), y en otras (hasta un 20%) porque ni siquiera fueron evaluadas.

Las transaminasas son enzimas que catalizan la transferencia reversible de un grupo amino entre un aminoácido y un cetoácido. Esta función es esencial para la producción de los aminoácidos necesarios para la síntesis de proteínas en el hígado. La aspartato aminotransferasa (= AST = glutámico oxalacético transaminasa = GOT ) se localiza sobre todo en la mitocondria y está presente en otros órganos, además del hígado, como son, en orden de frecuencia, el miocardio, músculo esquelético, riñones, cerebro, páncreas, pulmón, leucocitos y eritrocitos. Por el contrario, la alanina aminotransferasa (= ALT = glutámico pirúvico transaminasa = GPT) se localiza fundamentalmente a nivel citosólico en el hepatocito, lo que explica su mayor especificidad.

Ambas están presentes en suero en concentraciones inferiores a 30-40 UI/l, aunque el valor considerado como normal varía entre laboratorios, y se debería ajustar según sexo e índice corporal, presentando también algunas diferencias étnicas. La elevación plasmática de las transaminasas es un indicador sensible de daño hepatocelular, aunque no específico. Prácticamente cualquier enfermedad hepática que comporte un daño necroinflamatorio puede ser la causa. El aumento de transaminasas en sangre aparece cuando existe daño de la membrana celular y no siempre requiere la necrosis de los hepatocitos.
De hecho, hay escasa correlación entre el daño celular hepático y el grado de elevación de las transaminasas. Además, enfermedades no hepáticas también pueden ocasionar la elevación, aguda o crónica, de las cifras de transaminasas, sobre todo de la AST. Es el caso, por ejemplo, de procesos musculares como distrofias, polimiositis o traumatismos, o el infarto agudo de miocardio, incluso cuadros muy banales, tales como un proceso gripal, pueden producir elevaciones transitorias de las transaminasas. Es importante recordar que la elevación de un parámetro de laboratorio la definimos en función de criterios estadísticos que establecen la normalidad.
DESARROLLO
El perfil hepático es un conjunto de exámenes de sangre que indican si su hígado está funcionando bien. El hígado se encuentra en el abdomen y está ubicado cerca de su estómago. Es un órgano muy importante, porque descompone y almacena algunas sustancias como el azúcar, la grasa y las vitaminas. El hígado también remueve las drogas y otros químicos de su cuerpo.

Pruebas de función hepática


Función excretora Bilirrubina
Ácidos biliares

Función sintética Albúmina
Factores coagulación

Citolisis Transaminasas

Colestasis Bilirrubina
GGT y FA

Inflamación crónica Igs


Las pruebas rutinarias de función hepática pueden dividirse entre las que son valores reales de la función hepática, como seroalbúmina o tiempo de protombina; y aquellas que son simplemente marcadores de la enfermedad hepática o del sistema biliar, como las diferentes enzimas hepáticas.

Existen dos categorías generales de enzimas hepáticas. El primer grupo incluye las enzimas transaminasas: alaninoaminotransferasa (ALT) y la aspartato aminotransferasa (AST), antes conocidas como GPT y GOT respectivamente. Estas son enzimas indicadoras del daño a la célula hepática. El segundo grupo incluye ciertas enzimas hepáticas, como la fosfatasa alcalina y la gammaglutamiltranspeptidasa (GGT) las cuales indican obstrucción del sistema biliar, ya sea en el hígado o en los canales mayores de la bilis que se encuentran fuera de este órgano.
Las transaminasas TGO Y TGP son enzimas ampliamente distribuidas en el organismo con elevada concentración en corazón, hígado, músculo esquelético, riñón, eritrocitos. La actividad sérica en condiciones normales es muy baja o nula.
La TGP es una enzima con gran concentración en el en el hígado y en menor medida en los riñones, corazón los músculos.
Cuando hay una lesión de estos órganos la enzima es liberada a la sangre y aparece elevada en los análisis.
Como es una transaminasa más específicamente hepática que la GOT, aparece más elevada en las enfermedades hepáticas que en otras, por eso el cociente GPT/GOT será mayor de 1 en enfermedades ciertas enfermedades hepáticas como la hepatitis vírica.
La AST es más abundante en todos los tejidos humanos que la ALT. Las cifras de AST en suero están elevadas en las enfermedades hepatobiliares y cardiovasculares, en las miopatías y en otras afecciones diversas. Existen dos formas de AST: una motocondrial, que es la más abundante y una soluble en menor cantidad. Al contrario de la AST, la ALT se encuentra en su mayor parte en forma de enzima citoplasmática soluble, se encuentra principalmente en hígado, y en menor concentración en el miocardio y en otros tejidos.

Causas mas comunes en el aumento de las transaminasas: son encontrados niveles más altos de TGO y TGP en desordenes que causan la muerte de numerosas células (necrosis hepática extensa). Esto acontece en las hepatitis agudas A y B, en el daño pronunciado infligido por toxinas como la de una overdosis de acetaminofen (TYLENOL) o cuando el hígado es privado de sangre fresca que trae oxigeno y nutrientes. Las transaminasas en estas situaciones pueden variar de diez veces los límites superiores a lo normal para millares de unidades por mililitro.
Moderadas elevaciones de las transaminasas son comunes. Ellas son encontradas frecuentemente en pruebas de sangre de rutina en individuos saludables. Los niveles de las transaminasas en tales casos normalmente se sitúan entre 2 veces los límites superiores a lo normal y varias centenas de unidades. Es siempre importante sé hacer la media de los últimos cuatro resultados encontrados, para saber al cierto como están las transaminasas.
La causa más común de moderadas elevaciones de estas enzimas es el hígado graso (esteatoses). La causa más frecuente de hígado graso es el abuso de alcohol. Otras causas de hígado graso pueden ser la diabetes y la obesidad. La hepatitis C también está se tornando una causa importante de elevaciones de las transaminasas.
Causas menos comunes de transaminasas anormales pueden ser la hepatitis B crónica, la hemocromatosis, la enfermedad de Wilson y la hepatitis autoinmune. A pesar de no tan común cuanto en la hepatitis C, la hepatitis B puede se tornar crónica con resultados anormales en las transaminasas. Hemacromatosis es un desorden genético en el cual hay absorción excesiva de hierro ingerido en la alimentación conduciendo a la acumulación de hierro en el hígado y produciendo inflamación que puede llevar a la fibrosis y a la cirrosis.La enfermedad de Wilson es un desorden hereditario con acumulación excesiva de cobre en tejidos diversos inclusive el hígado y el cerebro. Cobre en el hígado pode producir inflamación y el cobre en el cerebro puede causar problemas psiquiátricos y perturbaciones motoras. La hepatitis autoinmune es provocada por los propios anticuerpos del organismo y sistemas de defensa que pasan a atacar el hígado. Raramente las transaminasas anormales pueden ser una señal de cáncer en el hígado.

MUESTRA: Suero o plasma
-Si la muestra a utilizar es plasma se debe usar heparina como anticoagulante.
-No utilizar muestras hemolizados.

Material requerido
-Espectrofotómetro
-Micropipetas
-Pipetas
-Tubos de ensayos
-Baño de agua a la temperatura indicada en el procedimiento a seguir, esto es si se utiliza un aparato manual.
-Cronometro
Condiciones de la muestra

- No utilizar muestras que hallan sido congeladas y descongeladas varias veces, pues ello puede ser causa de desnaturalización irreversible de la proteína constituyente de la enzima.

- Separar lo antes posible el coágulo del suero, pues ciertas enzimas (LDH y Fosfatasa Ácida) son componentes de las plaquetas, y se liberan al medio si existe destrucción de los mismos.

- No trabajar con muestras hemolizadas, ya que se han vertido los componentes intraeritrocitarios al plasma, sobre todo LDH y AST.

- Evitar el éxtasis venoso durante la extracción, pues se produce hipoxia y aumento de la permeabilidad de las células sanguíneas.

Condición de la reacción
-Disminución de Absorbancia
-Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 ó 366)
-Temperatura de reacción: 37°C
-Factor de calibración: 1740
-Los volúmenes de muestra y de sustrato reconstituido: pueden reducirse proporcionalmente, sin que varíen los factores de cálculo correspondiente

TECNICA (Perfil Enzimático Hepático)
“Wiener Lab”. Unitest.“Determinación de Alanita Aminotransferasa (ALT), en suero”.
FUNDAMENTO
La ALT o GPT, cataliza la siguiente reacción:
L-alanina + 2-oxoglutarato GPT Piruvato + L-glutamato

Piruvato + NADH + H LDH L-lactato + NAD

Instrucciones para el uso de ALT: El kit trae un Buffer listo para preparar. Al Sustrato se le agregan 2 mL de Buffer, se tapa y se agita hasta que la disolución este completa y fechar.
VALORES DE REFERENCIA.

TEMPERATURA 25º C 30º C 37º C
HOMBRE Hasta 22 U/I Hasta 29 U/I Hasta 41 U/I
MUJER Hasta 17 U/I Hasta 22 U/I Hasta 31 U/I


PROCEDIMIENTO:
Micro técnica
En una cubeta mantenida a 37 ºC, colocar:
Sustrato reconstituido ……………….1 ml
Muestra………………………………………100 ul
Mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el cronometro. Una vez mezclada se lee en el aparato y registrar la abs, al minuto luego 2, 3 y 4 min.Como este es un equipo semi automatizado, realiza el mismo los cálculos y nos da el valor de los resultados.
Para el desarrollo de esta técnica, la temperatura de reacción es de 37°C, tiempo de reacción 4 minutos y el factor de calibración es de 1740.
CALCULOS:
Lect de la muestra: 8,928.
Se determina la diferencia promedio, restando cada lectura de la anterior y promediando los valores (DAbs /min). Y se utiliza este promedio para los cálculos de los resultados.X/4= DeltaAbs/min y el resultado se reportara en UL­/L.
CONCLUSION
Los valores obtenidos se encuentran dentro de los valores de referencia. Pero para diagnosticar un daño hepático se necesita de la evaluación de otras pruebas más específicas; como la lactato deshidrogenasa, la gamma-glutamiltransferasa, y otras.

TECNICA (Perfil Enzimático Hepático)
“Wiener Lab”. Unitest.
Método AST o GOT: Basado en el siguiente esquema re accionante:

FUNDAMENTO
L-aspartato + 2-oxoglutarato GOT oxalacetato + L-glutamato

Oxalacetato + NADH + H MDH L-malato + NAD

Instrucciones para el uso de AST: El kit trae un Buffer listo para preparar. Al Sustrato se le agregan 20 mL de Buffer, se tapa y se agita hasta que la disolución este completa y fechar.

VALORES DE REFERENCIA.

TEMPERATURA 25º C 30º C 37º C
HOMBRE Hasta 18 U/I Hasta 25 U/I Hasta 38 U/I
MUJER Hasta 15 U/I Hasta 221U/I Hasta 32 U/I

PROCEDIMIENTO:

Micro técnica
En una cubeta mantenida a 37 ºC, colocar:
Sustrato reconstituido …………………1 ml
Muestra………………………………………100 ul
Para el desarrollo de esta técnica, la temperatura de reacción es de 37°C, tiempo de reacción 4 minutos y el factor de calibración es de 1740.

CALCULOS:

Lect de la muestra: 13,306.
Se determina la diferencia promedio, restando cada lectura de la anterior y promediando los valores (DAbs /min). Y se utiliza este promedio para los cálculos de los resultados.X/4= DeltaAbs/min y el resultado se reportara en UL­/L.

CONCLUSION
Los valores obtenidos se encuentran dentro de los valores de referencia. Pero para diagnosticar un daño hepático se necesita de la evaluación de otras pruebas más específicas; como la lactato deshidrogenasa, la gamma-glutamiltransferasa, y otras.


LIMITACIONES DE LOS METODOS:
Ver sustancias interferentes conocidas en MUESTRAS.
- Absorbancia inicial baja: cuando una vez agregado el suero la primera lectura (tiempo 0) es inferior a 0,800 D.O; estando el sustrato en condiciones, indica una muestra con muy alta actividad de GOT o GPT (que consume el NADH aún antes de esta lectura) o con una concentración de cetoácidos endógenos particularmente elevada. En este caso, repetir la determinación con muestra diluida con solución fisiológica y multiplicar el resultado por la dilución efectuada.
- La humectación es causa de deterioro el sustrato.


BIBLIOGRAFIA.
1. Inserto de Wiener Lab”. Unitest, C.A para determinación de GOT (AST) y GPT(ALT) por el método UV optimizado en suero o plasma.
2. Guía práctica de laboratorio # 5 de Evaluación del funcionalismo hepático. Bioquímica clínica 7mo semestre de Bioanálisis.
3. www.faes.esarchivos_pdfdownloadpandamodulo5REVIS5.PDF
4. www.buenasalud.com
5. www.svnp.es/Documen/transaminasas.pdf
6. www.scribd.com/doc/2150578/PERFIL-HEPATICO-PRACTICAS-DE-LAB
7. www. boards2.melodysoft.com

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